單細胞多重功能蛋白分析系統(tǒng)可以同時捕獲成千上萬的單個活細胞的完整生物分子和功能信息,且整個分析過程中細胞處于存活狀態(tài),即可在單細胞水平上實時監(jiān)測活細胞實際分泌的多達32種蛋白的表達。
產(chǎn)品特點:
高通量:每張芯片有12000個微通道,可同時捕獲500-1500個單細胞的多功能蛋白組學(xué)信息,可同時運行8張芯片
多重性:同時測定每個活細胞30+的分泌蛋白
全自動:樣本進,結(jié)果出,職需添加樣本,全自動進行單細胞捕獲、培養(yǎng)、多重ELISA、數(shù)據(jù)分析
操作流程:
實驗前準備:
樣本處理:確保細胞懸液活性>90%,濃度調(diào)整至1-5×10? cells/mL,避免團塊。
芯片水化:將IsoCode芯片置于培養(yǎng)基中預(yù)水化30分鐘,激活微室內(nèi)的抗體陣列。
試劑準備:準備好ELISA檢測試劑盒(含捕獲抗體、檢測抗體、熒光二抗等),所有試劑提前平衡至室溫。
單細胞加載與捕獲:
使用自動進樣器將細胞懸液注入IsoCode芯片。
系統(tǒng)通過微流控技術(shù)將單個細胞分配至12,000個獨立微室中,每個微室僅容納一個細胞。
流體動力學(xué)設(shè)計確保細胞均勻分布,避免多細胞聚集。
細胞培養(yǎng)與蛋白分泌:
芯片轉(zhuǎn)入恒溫培養(yǎng)模塊(37℃,5%CO?),細胞在微室內(nèi)存活并持續(xù)分泌蛋白。
培養(yǎng)時間根據(jù)實驗?zāi)康脑O(shè)定:
T細胞功能分析:通常為6-24小時;
動態(tài)監(jiān)測:可分時段多次成像,捕捉分泌動力學(xué)變化。
自動化蛋白檢測:
系統(tǒng)自動加入ELISA試劑,通過夾心法對分泌蛋白進行原位檢測。
每個微室可同步檢測多達32種蛋白(如IFN-γ、IL-2、TNF-α、Granzyme B等)。
熒光信號由高靈敏度成像系統(tǒng)采集,檢測下限低至2pg/mL。
數(shù)據(jù)分析與報告生成:
數(shù)據(jù)自動導(dǎo)入IsoSpeak軟件平臺,完成以下分析:
單細胞蛋白表達譜繪制;
細胞亞群聚類(如高分泌型、多功能型);
計算細胞多功能強度指數(shù)(PSI),量化細胞功能質(zhì)量。
軟件輸出可直接用于發(fā)表的圖表,支持多維可視化(熱圖、散點圖、雷達圖)。